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DNA pull down實驗技術(shù)

DNApulldown實驗技術(shù)1.實驗原理DNApulldown是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將生物素標(biāo)記的DNA片段結(jié)合在鏈霉親和素磁珠上，再與細胞核蛋白孵育，純化出與DNA片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物，做Westernblot檢測特定蛋白是否與靶DNA片段結(jié)合；做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如：轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白等)。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下，與已知的幾乎...

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GST pull down實驗技術(shù)

GSTPulldown實驗技術(shù)1.實驗原理Pulldown技術(shù)是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標(biāo)簽（如：GST標(biāo)簽、His標(biāo)簽）進行融合表達，而帶標(biāo)簽的誘餌蛋白能被特異結(jié)合該標(biāo)簽的固相親和配基捕獲，形成"次級親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Westernblot驗證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）融合標(biāo)簽從細菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白...

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常用的細胞凋亡檢測方法【大盤點】

細胞凋亡人體內(nèi)的細胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關(guān)細胞死亡過程的研究，已成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究的一個熱點。已知的細胞死亡方式起碼有兩種，即細胞壞死與細胞凋亡(apoptosis)。細胞壞死是早已被認(rèn)識到的一種細胞死亡方式，而細胞凋亡則是逐漸被認(rèn)識的一種細胞死亡方式。此圖片來源于網(wǎng)絡(luò)細胞凋亡是細胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅...

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【表觀遺傳】中樞性性早熟研究

中樞性性早熟（CPP）是兒科內(nèi)分泌的常見疾病，發(fā)病率較高，且逐年增加趨勢明顯。CPP可以導(dǎo)致患者或者家長出現(xiàn)社會、心理問題，而且還可能嚴(yán)重損害兒童的終身高。因此，CPP是兒科內(nèi)分泌醫(yī)生密切關(guān)注的疾病之一。CPP發(fā)病原因目前尚不明確，可能是由于某種因素促發(fā)了下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）神經(jīng)元，使其提前活化，通過分泌大量的GnRH，進而激活下丘腦-垂體-性腺軸。5-羥色胺（5-HT）最初在血清中發(fā)現(xiàn)，又名血清素，是一種吲哚衍生物，它廣泛存在于哺乳動物中。5-HT由色氨酸代...

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細胞生物學(xué)實驗

細胞生物學(xué)實驗及其定制化解決方案常用的細胞生物學(xué)相關(guān)實驗，主要包含：細胞培養(yǎng)、細胞保種、原代細胞分離和培養(yǎng)、細胞增殖檢測（MTT法/CCK8法）、細胞凋亡、細胞周期、細胞遷移、細胞侵襲、流式細胞分選、慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選、電生理檢測、定制化細胞模型等。原代細胞分離我司可提供細胞培養(yǎng)和原代細胞分離的服務(wù)。例如：原代schwann細胞、原代海馬神經(jīng)元細胞、原代成骨細胞、臍帶間充質(zhì)干細胞、海綿體平滑肌細胞等。細胞培養(yǎng)與傳代細胞凍存/保種細胞復(fù)蘇細胞換液培養(yǎng)細胞傳代培養(yǎng)細胞共培養(yǎng)細...

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細胞低氧培養(yǎng)模型簡介

人的生存離不開氧氣。如果你感覺很長一段時間里整天無精打采、昏昏欲睡，在排除睡眠不足的因素外，那么你有可能是血液中缺氧了。血液除了能在身體內(nèi)流動，攜帶能量、廢物等，最主要的功能就是攜帶氧氣，這是它的基本功能之一。如果血液缺氧，嚴(yán)重時就會導(dǎo)致器官病變，最常見的就是心梗、腦梗等。近年來，低氧(Hypoxic)于生物機體及細胞的生理作用及其分子機制研究越來越受到醫(yī)學(xué)科研學(xué)者的關(guān)注。低氧培養(yǎng)的適用研究領(lǐng)域近30年來與“低氧誘導(dǎo)”相關(guān)的文章統(tǒng)計(此項數(shù)據(jù)來源于Pubmed數(shù)據(jù)庫)細胞是生...

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細胞焦亡研究中的檢測指標(biāo)有哪些？

細胞焦亡是什么？細胞凋亡（Apoptosis）是經(jīng)典的細胞死亡方式，但隨著研究的不斷深入，很多細胞死亡現(xiàn)象并不能用細胞凋亡來解釋，隨著研究的深入，科學(xué)家又陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了一些新的細胞死亡新機制。細胞焦亡（Pyroptosis）便是近年來發(fā)現(xiàn)并證實的一種炎癥程序性細胞死亡，其特征為依賴于炎性半胱天冬酶（主要是caspase-1，4，5，11），并伴有大量促炎癥因子的釋放。細胞焦亡可由各種病理刺激引發(fā)，如中風(fēng)、心臟病發(fā)作、癌癥、感染等。按照激活機制，細胞焦亡可分為Caspase-1依賴...

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如何選擇合適的內(nèi)參抗體？

如何選擇合適的內(nèi)參抗體？Tips：在選擇內(nèi)參抗體時，我們需要遵循幾個原則：1.種屬來源哺乳動物的樣本需要選擇哺乳動物中穩(wěn)定表達的蛋白作為內(nèi)參，同樣的，植物樣本需要選擇植物中穩(wěn)定表達的蛋白作為內(nèi)參。2.細胞定位靶標(biāo)蛋白的細胞定位不同，適合的內(nèi)參也不同。如全細胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等，膜蛋白一般選擇NaKATPase，核蛋白則選擇LaminB1、HistoneH3等。3.分子量內(nèi)參蛋白的分子量需要與目標(biāo)蛋白的分子量有所區(qū)別，否則兩者條帶無法分...

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